qPCR SYBR Green Master Mix(Low Rox Plus)

qPCR SYBR Green Master Mix(Low Rox Plus)是 2×实时定量 PCR 扩增的预混合溶液。 Mix 中含有热启动DNA Polymerase 、SYBR Green I 、dNTPs、Mg2+及 Low Rox。使用时， 仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光 定量 PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。

      本品采用的 DNA 聚合酶配体可以随温度变化实时调节 DNA 聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升 PCR 反应扩增效率的因子，使定量 PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

适用机型
Applied Biosystems: 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio Dx, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex; Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000. 

运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期18个月。
本品避免反复冻融。 产品中含有荧光染料 SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。

结果分析
1）扩增曲线：
标准扩增曲线为 S 型。
Ct 值落在 20-30 之间时， 定量分析最准确；
Ct 值小于 10 ，需要将稀释模板后，重新进行实验；
Ct 值介于 30-35 之间时， 需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；
Ct 值大于 35 时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。
 

2)  熔解曲线：
熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。
熔解曲线出现双峰，需要通过 DNA 琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。
如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。