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外泌体(Exosomes)提取试剂盒-快速超纯
人阅读 发布时间:2024-03-29 15:17
产品组成 20T 50T 储存条件
1:组份 A 外泌体提取液A 40 ml 100 ml 2-8℃保存
2:组份 B 外泌体提取液B 40 ml 100 ml 2-8℃保存
3:组份 C 外泌体保存液C 15 ml 30 ml 2-8℃保存
4:组份 D 外泌体纯化离心管 D(大) 4 套 10 套 室温保存
5:组份 E 外泌体纯化离心管 E(小) 4 套 10 套 室温保存
保存温度: 有效期 : 适用样本:
2-8℃ 一年 血清/血浆
使用方法
清洗外泌体纯化离心管D(大):
1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。
2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用,则让液体保留在滤膜上,直到使用。
外泌体提取:
1. 收集2 ml待提取的血清/血浆样品,置2-8℃保存。
2. 将样品在4℃条件下,3000×g离心15分钟。弃沉淀,收集上清。
3. 小心将上清移入另一干净离心管中。
4. 将样品在4℃条件下,10000×g离心20分钟。弃沉淀,收集上清。
5. 小心将上清移入另一干净离心管中。
6. 在2 ml血清/血浆样品中加入2 ml提取液A,盖紧离心管盖。
7. 轻轻上下颠倒混匀1分钟左右,使液体充分混匀。制备成4 ml待提取外泌体悬液(I)。然后进行下列外泌体纯化步骤操作。
外泌体纯化:
1. 将外泌体纯化离心管D(大)内管插入所提供的一个配套离心管中。
2. 向内管中加入过4 ml的待提取外泌体悬液(I)样本,并盖上盖子。
3. 将盖好盖子的外泌体纯化离心管放入离心转子中,用一个类似的离心管平衡。
4. 以4000×g离心约10-15分钟。离心至大约剩余50 μl-100 μl液体。
5. 在50-100 μl残余液体中加入2 ml外泌体提取液B。
6. 以4000×g离心约10-15分钟。离心至大约剩余50 μl-100 μl液体。
7. 离心结束后将整个离心管从离心机中取出,取出内管。
8. 为了回收纯化后的外泌体,用200 μl移液器插入纯化管的底部,吸出纯化后的50 μl -100 μl纯化外泌体悬液(II)。
9. 套上外泌体纯化离心管E(小)的液体收集管,将纯化外泌体悬液(II)吸入外泌体纯化离心管E(小)的离心管(内管)中,在4℃,11000-13000×g条件下离心10-15分钟。
10. 吸取外泌体纯化离心管E(小)的收集管中的液体,即得到外泌体样品纯品。
11. 用纯水或缓冲液洗涤两种大小的内管和收集管,继续纯化下一个样品。
外泌体纯化离心管(大)清洗和保存:
1. 使用后用水冲洗干净;
2. 内管加入超纯水4 ml,4000×g离心5分钟;
3. 吸净内管中的水,加入4 ml 0.1 M NaOH,4000×g离心20分钟;
4. 用0.1 M NaOH 浸泡24小时;
5. 用水冲洗干净;
6. 用无菌水浸泡2-8℃保存。
7. 外管用自来水洗净后,用超纯水冲洗干净,晾干。