描述：

Lowry法蛋白定量应用Folin-酚试剂法原理如下：在碱性条件下，蛋白质与铜离子作用生成蛋白质-铜络合物，此络合物将Folin试剂还原，生成深蓝色物质，其颜色深浅与蛋白含量成正比，线性范围5～500ug/ml。Lowry法蛋白定量显色反应主要与样本中的酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸含量相关，样品中含有酚类、柠檬酸和巯基化合物等可对反应产生干扰。此外，待测样本也会因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。

组成：

（1000次）

Folin 酚 A 100ml×2  室温

Folin 酚 B   5ml       室温

Folin 酚 C   20ml      室温

R1           30ml      室温

BSA蛋白标准品(5mg/ml) 1ml   -20℃

以上试剂按要求温度保存，有效期至少一年。

注意：试剂开封使用后请及时密闭保存，R3试剂颜色变成深绿色即失效。

所需设备：

比色计、酶标仪或微板比色仪，最佳工作波长650nm。

操作步骤：


1.根据样本量，取适量Folin酚A和B按50:1混合，混合后24小时有效。

2.根据样本量，取适量BSA标准品用R2稀释10倍至浓度0.5mg/ml。

3.将标准品按 0、2、4、6、8、12、16、20ul加到96孔板中，加PBS补足至20ul。

4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度)，加20ul到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点误差比较大，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

5.各孔加入配好的Folin酚A+B试剂200ul，混匀，室温静置10分钟。

6.各孔加入20ulFolin酚C试剂，迅速混匀，37℃孵育30分钟。酶标仪测定A650 OD值，绘制标准曲线，计算蛋白浓度。